Sorgum merupakan tanaman serealia serbaguna yang potensial untuk dikembangkan. Oleh karenanya perlu kajian salah satunya yaitu dengan teknik molekuler berbasis DNA. Ekstraksi DNA merupakan proses penghancuran sel untuk memisahkan DNA dari protein dan polisakarida. Proses ekstraksi DNA yaitu pengaturan suhu dan lama inkubasi sangat menentukan kualitas dan kuantitas DNA yang dihasilkan sehingga perlu dilakukan kajian dan optimasi. Kegiatan bertujuan untuk mengkaji suhu dan lama inkubasi yang optimal dalam mengekstraksi DNA dari daun sorgum dengan kondisi berbeda. Metode yang digunakan meliputi persiapan sampel daun sorgum, ekstraksi DNA dan uji kuantitatif DNA. Hasil kajian menunjukkkan ekstraksi DNA sampel daun sorgum yang segar menghasilkan konsentrasi DNA yang tinggi dan kemurnian yang lebih baik dibanding dengan DNA sampel daun sorgum yang didinginkan terlebih dahulu selama semalaman pada suhu -20°C. Konsentrasi DNA tertinggi diperoleh dari perlakuan inkubasi 65°C selama 30 menit yaitu konsentasi DNA 998 ng/µl dengan kemurnian 1,795 dan perlakuan inkubasi 60°C selama 45 menit yaitu dengan konsentrasi 958 ng/µl dan kemurnian 1,809.