Konstruksi Plasmid Overekspresi RF2A Dan Transformasi Kedalam Tanaman Untuk Peningkatan Ketahanan Tanaman Padi Terhadap Virus Tungro
No Thumbnail Available
Date
2017
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Balai Besar Penelitian Tanaman Padi (BB Padi)
Abstract
Penyakit tungro disebabkan oleh infeksi bersama Rice tungro bacilliform tungrovirus (RTBV) dan Rice tungro spherical waikavirus (RTSV). Penyakit ini ditularkan pada tanaman melalui vektor wereng hijau Nephottetix virescens. Penentu terjadinya gejala adalah akibat infeksi RTBV, walaupun RTBV tidak dapat menginfeksi tanaman tanpa RTSV. Pada tanaman terinfeksi, RTBV terakumulasi dalam sel phloem tanaman padi. RF2a yang termasuk kedalam kelompok basic leucine zipper protein (bZIP), merupakan faktor transkripsi yang memegang peranan penting pada aktivasi promotor RTBV atau dengan kata lain penting untuk replikasi virus RTBV pada jaringan tanaman terinfeksi. RF2a diperlukan juga untuk perkembangan tanaman inangnya itu sendiri. Overekspresi faktor transkripsi RF2a pada tanaman padi transgenik telah diketahui dapat meningkatkan ketahanan tanaman terhadap infeksi RTBV. Tujuan dalam penelitian ini adalah menggunakan strategi overekspresi faktor transkripsi RF2a untuk mengembangkan padi transgenik tahan penyakit tungro. Penelitian dilakukan di laboratorium dan rumah kaca transgenik Laboratorium Genomik dan Perbaikan Mutu Tanaman, Pusat Penelitian Bioteknologi LIPI sejak Agustus 2014 sampai Agustus 2015. Dalam penelitian ini telah dilakukan konstruksi plasmid biner pCAMBIA 1305.1 rekombinan membawa RF2a dengan promoter konstitutif CaMV35S dan transformasinya ke dalam tanaman padi varietas IR64. RF2a disintesis dengan menambahkan situs enzim restriksi NcoI pada sisi 5’ dan BstEII pada sisi 3’ dari CDS RF2a. Tiga situs enzim NcoI yang terdapat dalam CDS RF2a dihilangkan dengan melakukan mutasi satu basa dari basa C menjadi G pada kodon situs enzim pada basa ke- 707, ke- 743 dan ke- 1079 tanpa merubah muatan asam amino yang dihasilkan. RF2a sintetik kemudian difusikan kedalam plasmid pCAMBIA 1305.1. Keberadaan RF2a dikonfirmasi melalui pemotongan plasmid dengan enzim NcoI dan BstEII. Transformasi pCAMBIA 1305.1 rekombinan ke dalam tanaman padi varietas IR64 dilakukan dengan bantuan Agrobacterium tumefaciens LBA4404. Keberadaan RF2a dalam genom tanaman padi telah dilakukan dengan PCR menggunakan sepasang primer yang spesifik untuk gen hpt. Penelitian ini menghasilkan plasmid overekspresi RF2a dan tanaman padi transgenik yang diharapkan tahan terhadap virus tungro.
Description
12 hlm.; 7 gambar
Keywords
TUNGRO, KETAHANAN PADI, KONSTRUKSI PLASMID, RF2A, TRANSFORMASI TA¬NAMAN