Konstruksi dan Ekspresi Transien Kaset Kimera yang Mengandung Fusi Promotor CaMV 35S atau OsAER1 dan Gen GUS pada Tembakau
No Thumbnail Available
Date
2018
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
BB Biogen
Abstract
Uji gen pelapor umumnya digunakan untuk mempelajari pola ekspresi gen dan aktivitas promotor. Tujuan penelitian ini adalah merakit konstruk gen kimera yang terdiri atas promotor konstitutif CaMV 35S atau promotor gen OsAER1 yang disambungkan
dengan gen pelapor GUS yang menyandi enzim β-glucuronidase dan mendapatkan metode transformasi transien yang efisien pada kecambah tembakau utuh dengan bantuan Agrobacterium tumefaciens. Fragmen promotor CaMV 35S yang diisolasi dari vektor biner pCAMBIA1301 dan promotor gen OsAER1 yang diamplifikasi dari DNA padi cv. Awan Kuning masingmasing diligasikan ke pCAMBIA1300int::gus::tNOS untuk menghasilkan vektor biner pCAMBIA1300int::p35S::gus::tNOS dan pCAMBIA 1300int::prOsAER1::gus::tNOS. Kedua konstruk vektor ini digunakan untuk transformasi transien kecambah tembakau berumur 5 hari. Transformasi transien tembakau dilakukan dengan menggunakan dua kerapatan bakteri (OD600 = 0,5 dan OD600 = 1,0) yang dikombinasikan dengan perlakuan vakum selama 15 menit dan 30 menit. Kecambah tembakau yang ditransformasi dengan pCAMBIA 1300int::p35S::gus::tNOS menunjukkan efisiensi transformasi yang lebih tinggi dibanding dengan yang ditransformasi dengan pCAMBIA1300int::prOsAER1::gus::tNOS. Efisiensi transformasi yang lebih tinggi diperoleh pada transformasi menggunakan bakteri dengan kerapatan OD600 = 0,5 dikombinasikan dengan perlakuan vakum selama 30 menit. Ekspresi gen GUS pada kecambah tembakau yang ditransformasi dengan konstruk promotor CaMV 35S diamati di seluruh organ kecambah tembakau (akar, hipokotil, kotiledon, dan daun), sedangkan ekspresi gen GUS pada kecambah tembakau yang ditransformasi dengan konstruk promotor gen OsAER1 terjadi di bagian akar, hipokotil, dan kotiledon, tetapi tidak di daun. Hasil ini menunjukkan bahwa transformasi transien merupakan metode yang cepat dan sederhana untuk pengujian konstruk gen kimera.
Description
Keywords
Gen GUS, tembakau, transien transformasi, ekspresi gen.