Konstruksi dan Kloning Plasmid pCambia1301 dengan Gen Cry1Ab
No Thumbnail Available
Date
2005
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
BB Biogen
Abstract
Penelitian konstruksi dan kloning plasmid pCambia1301 dengan gen cry1Ab telah dilakukan di Laboratorium Biologi Molekuler, Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian, Bogor. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan konstruksi plasmid pCambia yang mengandung gen cry1Ab. Proses konstruksi dilakukan dengan penyisipan gen cry1Ab pada vektor pCambia1301 menggunakan proses ligasi. Ligan ditransformasi ke dalam Escherichia coliDH5α dengan metode kejutan panas dan ke dalam Agrobacterium tumefaciens LBA4404 dengan metode kejutan dingin atau tri-parental mating. Hasil ligasi dan transformasi ke dalam bakteri diperoleh dua DNA plasmid dari dua koloni berbeda. DNA plasmid rekombinan tersebut sebagai pC1Ab dengan ukuran 14,8 kb berdasarkan uji pola restriksi dengan enzim HindIII yang membentuk dua fragmen DNA berukuran 11,8 kb dan 3,0 kb. Uji pola restriksi dengan enzim HindIII dan EcoRI diperoleh 3 fragmen DNA berukuran 11,8 kb, 2,7 kb, dan 0,3 kb. Uji pola restriksi dengan BamHI dan HindIII diperoleh 3 fragmen DNA berukuran 11,8 kb, 2,1 kb, dan 0,8 kb. Sedangkan, pemotongan dengan enzim EcoRI menunjukkan dua fragmen DNA berukuran 14,5 kb dan 0,3 kb dari kedua DNA plasmid pC1Ab yang menunjukkan arah yang sama, yaitu ke kiri. Hasil uji PCR dari plasmid pC1Ab diperoleh fragmen gen cry1Ab berukuran 1,0 kb. Hasil uji GUS terhadap plasmid pC1Ab yang ditrasformasikan ke eksplan kotiledon melalui A. tumefaciens menunjukkan reaksi GUS positip berwarna biru.
Description
Keywords
Plasmid biner, gen cry1Ab, Agrobacterium tumefaciens, uji pola restriksi.